檢測試劑盒提供的微孔板上的微孔預包被了氯黴素抗體。標準品中的氯黴素即抗原和樣品中的抗原分別與酶標記結合物(酶標記抗原)同時競爭包被抗體上的有限結合位點,形成抗體/抗原、抗體/酶標記抗原複合物。室溫孵育,使競爭反應完全。洗滌酶標板,除去遊離的反應物。加入底物,在室溫下,酶標記結合物上的辣根過氧化物酶催化底物發生顯色反應,孵育一定時間使顏色發生大變化。加入終止液使反應終止,同時反應物顏色由藍轉黃。顏色的深度與標準品/樣品中的氯黴素含量成反比,使用酶標儀在450nm波長下讀取相應的吸光度值。構建標準曲線,計算樣品中濃度。
檢測試劑盒的注意事項:
1.由於使用96孔板進行檢測,如果細胞培養時間較長,一定要注意蒸發的問題。一方麵,由於96孔板周圍一圈容易蒸發,可以采取棄用周圍一圈的辦法,改加PBS,水或培養液;另一方麵,可以把96孔板置於靠近培養箱內水源的地方,以緩解蒸發。
2.溶液為黃色需避光保存,長時間光照會導致失效。當顏色變為灰綠色時,請勿使用。溶解液結凍或產生沉澱時可以37℃水浴孵育以促進溶解,並且必須在全部溶解並混勻後使用。
3.為了您的安全和健康,請穿實驗服並戴一次性手套操作。