無菌操作基本技術

　　無菌操作技術不僅在微生物學研究和應用上起著舉足輕重的作用，在許多生物技術中也被廣泛應用，例如轉基因技術、單克隆抗體技術等。

　　無菌室，微生物實驗室內專辟的一個小房間，室外設一個緩衝間，緩衝間的門和無菌室的門不要朝向同一方向，以免氣流帶進雜菌。無菌室和緩衝間都必須密閉，無菌室內的地麵、牆壁必須平整，不易藏汙納垢、便於清洗，室內裝備的換氣設備必須有空氣過濾裝置。工作台的台麵應該處於水平狀態，無菌室和緩衝間都裝有紫外線燈（距離工作台麵1米），工作人員進入無菌室應穿戴滅過菌的服裝、帽子。

　　超淨台，主要功能是利用空氣層流裝置排除工作台麵上部包括微生物在內的各種微小塵埃，通過電動裝置使空氣通過高效過濾器具後進入工作台麵，使台麵始終保持在流動無菌空氣控製之下。在條件較困難的地方，也可以用木製無菌箱代替超淨台（正麵開有兩個洞，不操作時用推拉式小門擋住，操作時可以將雙臂伸進去；正麵上部裝有玻璃，便於在內部操作，箱內部裝有紫外線燈，從側麵小門可以放進去器具和菌種、細胞株等）。

　　微生物的培養

　　在微生物的培養過程中，要保持培養物純淨性；培養微生物的要領，是為所需要的微生物提供良好的生存環境，同時阻止或抑製其他微生物的生長。

　　（一）培養基

　　1.認識培養基的基本組成成分，從生物體構成的基本元素這一角度理解培養基中為什麽都需要具備這些基本成分。

　　2.培養基的用途和種類：液體和固體兩大類。

　　3.不同的微生物往往需要采用不同的培養基配方；盡管培養基的配方各不相同，但是其基本成分都包括水、碳源、氮源和無機鹽。

　　4.培養基是否合格（無菌試驗）：培養基在恒溫箱中保溫1～2d後無菌落生長（液體不變渾濁），說明培養基的製備是成功的，否則需要重新製備。

　　（二）無菌技術

　　1.無菌技術的概念：無菌操作泛指在培養微生物的操作中，所有防止雜菌汙染的方法。日常的生活環境中，每時每刻每處都存在著微生物，任何一個不經意的動作都可能將某種微生物引入到培養物中。在具備無菌環境和獲得無菌材料後，還要始終保持無菌狀態，才能對某種特定的已知微生物進行研究或利用它們的功能，否則外界的各種微生物很容易混入。外界不相幹的微生物混入的現象，在微生物學叫做汙染雜菌。防止汙染是微生物學工作中十分關鍵的技術：徹底滅菌和防止汙染是無菌技術的兩個方麵。此外，要有效避免操作者自身被微生物感染，還要防止所研究的微生物，特別是致病微生物或經過基因工程改造了的本來自然界不存在的微生物從一色桃子在线观看的實驗容器中逃逸到外界環境中去（生物安全）。無菌操作非常重要，無論是倒平板、平板劃線操作，還是平板稀釋塗布法，其操作中的每一步都需要做到“無菌”，隻有熟練、規範地進行無菌操作，才可能成功地培養微生物。

　　2.消毒與滅菌的概念：

　　（1）培養細菌用的培養基與培養皿（需要滅菌）

　　（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（需要滅菌）

　　（3）實驗操作者的雙手（需要消毒）

　　（4）接種環、針、塗布棒：灼燒滅菌（外焰）。