亦稱傳代培養保藏法，包括斜麵培養、穿刺培養、液體培養等。是指將菌種接種於適宜的培養基中，條件下培養，待生長充分後，於4～6℃進行保存並間隔一定時間進行移植培養的菌種保藏方法。

　　操作步驟如下：

　　培養基製備

　　1、器皿準備

　　培養基製備過程中所用的一些玻璃器皿，如，三角瓶、試管、培養皿、燒杯、吸管等，經洗滌、幹燥、包裝、滅菌後使用。

　　2、溶解培養基配料

　　先在燒杯中放適量水，按培養基配方稱取各項材料，依次將緩衝化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解，加足水量，攪拌均勻。

　　3、調pH值

　　配料溶解後將培養基冷卻至室溫，根據要求加稀酸（0.1mol/L鹽酸）或稀堿(10%氫氧化鈉)調pH值。加酸或堿液時要緩慢、少量、多次攪拌，防止局部過堿或過酸而導致測量不準確和營養成分被破壞。

　　4、加凝固劑

　　配製固體培養基時需加凝固劑，如，瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養基中，加熱並不斷攪拌至融解，再補足所蒸發水分。

　　5、過濾分裝

　　在二層紗布中間夾入脫脂棉，將配好的培養基趁熱過濾並分裝。斜麵培養基分裝量約為試管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培養基分裝量以試管高度的二分之一為宜。分裝過程中勿使培養基沾汙管口，以免弄濕棉塞造成汙染。

　　6、包紮標記

　　將試管加棉塞，外麵包紮一層牛皮紙或鋁箔並注明培養基名稱及配製日期。

　　7、滅菌

　　根據要求將培養基滅菌，通常蒸汽滅菌為121℃，15～20min。

　　8、斜麵擺放

　　滅菌後及時擺放斜麵，斜麵長度不超過試管管長的二分之一為宜。

　　9、無菌檢查

　　將滅菌的培養基放入培養箱中作無菌檢驗，通常30℃培養1～3天。無菌檢查合格後將其保存於4℃下備用。