亦稱傳代培養保藏法,包括斜麵培養、穿刺培養、液體培養等。是指將菌種接種於適宜的培養基中,條件下培養,待生長充分後,於4~6℃進行保存並間隔一定時間進行移植培養的菌種保藏方法。
操作步驟如下:
培養基製備
1、器皿準備
培養基製備過程中所用的一些玻璃器皿,如,三角瓶、試管、培養皿、燒杯、吸管等,經洗滌、幹燥、包裝、滅菌後使用。
2、溶解培養基配料
先在燒杯中放適量水,按培養基配方稱取各項材料,依次將緩衝化合物、主要元素、微量元素、維生素等材料加入水中溶解,加足水量,攪拌均勻。
3、調pH值
配料溶解後將培養基冷卻至室溫,根據要求加稀酸(0.1mol/L鹽酸)或稀堿(10%氫氧化鈉)調pH值。加酸或堿液時要緩慢、少量、多次攪拌,防止局部過堿或過酸而導致測量不準確和營養成分被破壞。
4、加凝固劑
配製固體培養基時需加凝固劑,如,瓊脂、明膠等。將凝固劑加入液體培養基中,加熱並不斷攪拌至融解,再補足所蒸發水分。
5、過濾分裝
在二層紗布中間夾入脫脂棉,將配好的培養基趁熱過濾並分裝。斜麵培養基分裝量約為試管高度的四分之一(4~5mL),穿刺培養基分裝量以試管高度的二分之一為宜。分裝過程中勿使培養基沾汙管口,以免弄濕棉塞造成汙染。
6、包紮標記
將試管加棉塞,外麵包紮一層牛皮紙或鋁箔並注明培養基名稱及配製日期。
7、滅菌
根據要求將培養基滅菌,通常蒸汽滅菌為121℃,15~20min。
8、斜麵擺放
滅菌後及時擺放斜麵,斜麵長度不超過試管管長的二分之一為宜。
9、無菌檢查
將滅菌的培養基放入培養箱中作無菌檢驗,通常30℃培養1~3天。無菌檢查合格後將其保存於4℃下備用。